目的：构建肺炎克雷伯菌LuxR家族KbvR基因缺失突变株与回补株，分析KbvR在肺炎克雷伯菌生长、生物膜形成及荚膜生成中的作用。方法通过自杀载体pKO3-Km质粒构建KbvR基因敲除株，然后扩增出包含KbvR基因编码区、启动子结合区及转录终止区的基因片段，克隆至pGEM-T-easy质粒上构建KbvR基因回补株。绘制不同菌株生长曲线，了解KbvR对细菌生长的影响。通过结晶紫定量实验检测KbvR基因对细菌生物膜形成的影响，拉丝实验、离心试验及RT-PCR检测KbvR基因对细菌荚膜形成的影响。结果成功获得KbvR基因缺失突变株及回补株，RT-PCR结果显示KbvR基因在缺失突变株中不表达，在回补株中重新表达。KbvR基因不影响细菌的生长速度，基因敲除株后细菌生物膜形成及荚膜生成能力下降。体外试管静止培养48 h，与野生株相比基因缺失突变株生物膜形成能力明显下降，而KbvR基因回补株在液体培养基表面能形成明显生物膜。结晶紫染色定量实验发现，基因缺失突变株生物膜形成能力显著低于野生株（P<0.01）。超粘性实验和RT-PCR结果均显示，KbvR基因缺失突变株荚膜形成能力明显下降，说明KbvR基因影响肺炎克雷伯菌生物膜和荚膜的形成。结论 KbvR基因作为密度感应系统LuxR孤儿调控转录因子，正调控肺炎克雷伯菌生物膜的形成。荚膜是细
作者：徐丽；林迪斯；杨靖；李健；李蓓
来源：南方医科大学学报 2016 年 36卷 10期
