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目的 研究胍丁胺对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞活化及损伤的影响,并探究其与NF-κκB、MAPK通路及活性氧(ROS)的产生是否相关.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs).MTT法检测0~4 mmol/L胍丁胺作用24h对HUVECs细胞活力的影响.HUVECs细胞机分为:①空白对照组;②脂多糖(10 μμg/mL)组;③胍丁胺干预组:脂多糖(10 μg/mL)+胍丁胺(0.125、0.5、1 mmol/L).ELISA法检测24h细胞上清中可溶性细胞间粘附分子-1 (sICAM-1)、可溶性血管间粘附分子-1(sVCAM-1)、可溶性E-选择素(sE-selectin)及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)水平,确定胍丁胺最适干预浓度(1 mmol/L).后续实验中HUVECs细胞随机分为:对照组、脂多糖(10 μg/mL)组、胍丁胺(1mmol/L)组及脂多糖(10 μg/mL)+胍丁胺(1 mmol/L)共同组,作用1、6、24 h;抑制剂组即在脂多糖刺激前1h,用10 μmol/L NF-κB(PDTC)、ERK1/2(PD98059)及p38(SB203580)抑制剂进行预处理.qRT-PCR法检测ICAM-1、VCAM-1、E-selectin、MCP-1、血红素氧合酶(HO-1)、醌氧化还原酶(NQO1)mRNA表达水平;DCFH-DA作为荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平;Western blot法检测细胞VCAM-1、ICAM-1、p65、磷酸化-p65(p-p65)、IκBα、p-IκBα、ERK、p-ERK、p38、p-p38、JNK、p-JNK蛋白表达水平.结果 (1)

作者:殷商启;朱俊宇;罗莉;杨霞;梁华平;罗艳

来源:南方医科大学学报 2018 年 38卷 6期

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作者:
殷商启;朱俊宇;罗莉;杨霞;梁华平;罗艳
来源:
南方医科大学学报 2018 年 38卷 6期
标签:
胍丁胺 NF-κB MAPK 活性氧 人脐静脉内皮细胞 脂多糖
目的 研究胍丁胺对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞活化及损伤的影响,并探究其与NF-κκB、MAPK通路及活性氧(ROS)的产生是否相关.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs).MTT法检测0~4 mmol/L胍丁胺作用24h对HUVECs细胞活力的影响.HUVECs细胞机分为:①空白对照组;②脂多糖(10 μμg/mL)组;③胍丁胺干预组:脂多糖(10 μg/mL)+胍丁胺(0.125、0.5、1 mmol/L).ELISA法检测24h细胞上清中可溶性细胞间粘附分子-1 (sICAM-1)、可溶性血管间粘附分子-1(sVCAM-1)、可溶性E-选择素(sE-selectin)及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)水平,确定胍丁胺最适干预浓度(1 mmol/L).后续实验中HUVECs细胞随机分为:对照组、脂多糖(10 μg/mL)组、胍丁胺(1mmol/L)组及脂多糖(10 μg/mL)+胍丁胺(1 mmol/L)共同组,作用1、6、24 h;抑制剂组即在脂多糖刺激前1h,用10 μmol/L NF-κB(PDTC)、ERK1/2(PD98059)及p38(SB203580)抑制剂进行预处理.qRT-PCR法检测ICAM-1、VCAM-1、E-selectin、MCP-1、血红素氧合酶(HO-1)、醌氧化还原酶(NQO1)mRNA表达水平;DCFH-DA作为荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平;Western blot法检测细胞VCAM-1、ICAM-1、p65、磷酸化-p65(p-p65)、IκBα、p-IκBα、ERK、p-ERK、p38、p-p38、JNK、p-JNK蛋白表达水平.结果 (1)