目的构建HPV16E7-HSP70融合基因原核表达质粒,为进一步研究HPV16E7-HSP70融合蛋白抗喉癌免疫活性奠定基础.方法PCR扩增HPV1 6E7、HSP70并分别导入相应酶切位点;HPV16E7采用Nhel和Sacl接入原核表达载体pET28a得到pET28a-HPV16E7中间质粒;HSP70的PCR产物采用TA连接亚克隆到pGEM-Teasy载体;Sall和Notl双酶切后的HSP70片段和pET28a-HPV16E7线性质粒,经连接酶连接,采用PCR、DNA测序鉴定重组质粒;同时,重组质粒转入BL21(DE3)表达,采用IPTG诱导和Western Blot进一步鉴定重组质粒的表达情况.结果重组质粒经PCR、DNA测序证实插入了HPV16E7-HSP70融合基因,且蛋白开放读码框与pET28a的6×His标签一致.通过IPTG诱导表达和Western Blot证实融合蛋白可以在原核细菌中正确表达.结论成功构建pET28a-HPV1 6E7-HSP70重组原核表达质粒.
作者：赵舒薇；邱杰；英信江；叶青；孙爱华
来源：中国耳鼻咽喉头颈外科 2006 年 13卷 2期
