目的 探讨应用RNA干扰技术同时沉默人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、Bcl-xl三个基因对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞生长增殖的影响,并与单独沉默hTERT基因对细胞的生长增殖作用进行比较.方法 构建表达hTERT mRNA特异的、含荧光素基因的shRNA(short hairpin RNA,短发夹RNA)真核表达质粒pshRNA1;根据hTERT、VEGF、Bcl-xl的cDNA序列构建串联表达3个shRNA序列的重组质粒pshRNA2.将上述质粒分别转染Hep-2细胞,MTT法观察Hep-2细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白印迹法检验蛋白表达.结果 pshRNA1、pshRNA2转染Hep-2细胞后,细胞增殖受到明显抑制,并诱导细胞凋亡.且pshRNA2对细胞的生长增殖抑制作用明显强于pshRNA1.pshRNA1转染细胞后hTERT蛋白表达下降,pshRNA2转染细胞后hTERT、VEGF、Bcl-xl蛋白表达均明显下降.结论 与单独沉默hTERT相比,同时沉默hTERT、VEGF、Bd-xl基因表现出更强大的抑制细胞增殖效应,多基因共沉默为喉癌的基因治疗提供了新思路.
作者：马伟；王燕；陈始明；肖伯奎；陈伟；陈晨；陶泽璋
来源：中国耳鼻咽喉头颈外科 2009 年 16卷 3期
