目的：寻找基于p53-mdm2复合物晶体结构的mdm2抑制剂，使p53释放出来，发挥其抗癌活性。方法：根据已知的p53-mdm2复合物晶体的空间结构，在计算机上模拟设计出23个非肽小分子化合物。将p53的全长开放阅读框（ORF）和mdm2的部分ORF克隆进原核表达载体，异丙基硫代-β-D半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白表达。金属螯和层析柱纯化蛋白。Western blot检测蛋白的质量，十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及标准曲线法进行蛋白定量。用ELISA方法检测非肽小分子化合物与mdm2的亲和性及作用的饱和浓度。用MTT方法进行细胞生长抑制实验。结果：SDS-PAGE和Western blot检测显示原核表达的p53和mdm2蛋白质量和纯度良好，可供后续实验。ELISA结果显示非肽小分子目标化合物及中间化合物32个化合物中13个与对照相比对mdm2有一定的亲和作用，其中5个亲和性较高，并有一定的饱和作用量。体外实验表明这5个化合物对几种表达野生型p53的肿瘤细胞系有生长抑制作用。结论：基于p53-mdm2复合物晶体的空间结构设计的非肽小分子化合物，通过抑制mdm2-p53的结合，在体外显示有一定的抑制肿瘤细胞生长的作用。
作者：赵剑华；刘芝华；骆爱萍；吴旻；尹大力；陈捷
来源：癌症 2001 年 20卷 4期
