背景与目的:低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α)在促血管新生中起关键作用,通过基因沉默方法研究促肿瘤发展因子对细胞分化的影响可为体内抗癌治疗提供指导.本研究构建了HIF-1α的RNA干扰(RNAi)质粒,在体外研究其对人外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)向血管内皮细胞(endothelial cell,EC)分化的影响.方法:质粒重组技术构建siRNA-HIF-1α质粒,电穿孔转染质粒,计算转染效率;RT-PCR法检测HIF-1α、HIF-1β及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA在质粒转染前后含量变化;免疫组化方法检测在常氧/低氧下和siRNA-HIF-1α质粒转染后12 h HIF-1α蛋白表达情况;流式细胞术测定FITC-CD31+的EPCs/EC在各组细胞转染3～10天后的组间差异;一氧化氮酶法鉴定各组细胞VEGF依赖性一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)含量;镜下观察转染前后细胞形态及分化程度.结果:重组子质粒测序鉴定证实siRNA-HIF-1α构建与设计相符,电转效率约20
作者：姜萌；王长谦；王彬尧；黄定九
来源：癌症 2005 年 24卷 11期
