目的观察无血清条件下bcl-2对神经酰胺诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的影响.方法通过脂质体介导的基因转染,建立稳定转染表达反义bcl-2 mRNA的cDNA片段的真核表达质粒的人肝癌细胞HepG2(HepG2-anti-bcl-2)并鉴定,采用AO-EB荧光染色、流式细胞术DNA倍体分析和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,分光光度法测定Caspase-3活性.结果终浓度50 μmol/L C2-神经酰胺作用24 h,可诱导无血清培养的HepG2细胞、HepG2-vector细胞及HepG2-anti-bcl-2细胞发生凋亡.AO-EB染色可见典型的细胞凋亡表现.流式细胞仪检测显示C2-神经酰胺作用12,18,24 h,HepG2-anti-bcl-2细胞凋亡率较同时间HepG2细胞及HepG2-vector细胞凋亡率显著增加(P<0.05).终浓度50 μmol/L C2-神经酰胺作用12 h,HepG2-anti-bcl-2细胞DNA凝胶电泳呈现梯状条带,而HepG2 细胞及HepG2-vector细胞作用24 h出现DNA梯状条带.HepG2细胞和HepG2-vector细胞Caspase-3活性随C2-神经酰胺(50 μmol/L)作用时间延长而增强,HepG2-anti-bcl-2细胞Caspase-3活性始终维持较高水平.结论低表达bcl-2可通过增加Caspase-3活性从而促进C2-神经酰胺诱导的HepG2细胞凋亡.
作者：高永琳；郑大利；许云禄
来源：福建医科大学学报 2006 年 40卷 2期
