目的研究乙型肝炎病毒X（HBVX）基因在肝细胞HL-7702中的稳定表达对其细胞凋亡和表达HSP70的影响，并探讨二者之间的关联。方法将已构建好的HBVX基因真核表达载体pcDNA3-X转染人肝细胞HL-7702，48h后经G418筛选出稳定表达HBVX基因的肝细胞株（L02/HBx）。RT-PCR、蛋白印迹实验鉴定L02/HBx细胞HBVX基因的稳定表达。以转染空质粒肝细胞（L02/pcDNA3）为对照，运用流式细胞分析、TUNEL分析和DNA ladder观察检测L02/HBx细胞凋亡情况。基因芯片技术筛查L02/HBx和L02/pcDNA3两组肝细胞差异表达的凋亡相关基因，并运用蛋白印迹实验技术对差异表达的HSP70基因进行蛋白水平验证。<br> 结果RT-PCR和蛋白印迹实验显示，L02/HBx细胞中有HBVX基因mRNA和蛋白的表达。流式细胞和TUNEL分析显示，L02/HBx细胞组的凋亡率显著高于对照组L02/pcDNA3，DNA ladder可观测到L02/HBx的凋亡现象，而对照组未观测到。两次基因芯片结果筛查出L02/HBx细胞组与对照组差异表达基因HSP70，蛋白印迹实验进一步证实HSP70在L02/HBx细胞中的蛋白表达显著高于未表达X基因的肝细胞组。结论HBVX基因在肝细胞HL-7702中的表达促进了肝细胞的凋亡，上调了肝细胞中HSP70基因的表达，从而在乙型肝炎病毒致肝细胞癌变的过程中起重要作用。
作者：陈红英；陈治新；王小众
来源：福建医科大学学报 2013 年 5期
