目的 通过对离体培养的原代细胞和第3代Ⅱ型肺泡上皮细胞(alveolar typeⅡepithelial cells,AECⅡ)进行分化表型鉴定,探索AECⅡ离体传代培养的可行性.方法 联合应用肺循环灌注、支气管肺泡灌洗、双酶联合螯合剂灌注消化、物理过滤、差速离心、贴壁纯化、免疫吸附等方法分离和纯化大鼠AECⅡ.纯化的AECⅡ接种于基质胶包被的培养皿,在含10μg/L角质细胞生长因子、5％胎牛血清的DMEM/F12培养基中进行离体培养.收集原代和第3培养细胞,透射电镜观察细胞超微结构,免疫细胞化学染色检测肺泡表面活性蛋白A(surfactant protein A,SP-A)表达情况,并进行碱性磷酸酶染色鉴定细胞分化表型.结果 AECⅡ产量为(21.3±5.8)×106/鼠,活细胞比例为(96.5±0.8)％.细胞培养至第3代,其形态、生长特征与原代培养细胞无明显差异.透射电镜观察证实原代细胞及第3代细胞均具备AECⅡ的特征性结构,SP-A免疫细胞化学染色显示原代细胞及第3代细胞阳性比例均超过95％,碱性磷酸酶染色显示原代细胞及第3代细胞阳性比例分别为(85.2±3.7)％和(90.4±4.2)％.结论 在适宜的培养条件下,离体培养的第3代AECⅡ能够维持相对稳定的分化表型,可以用于离体实验.
作者：姜迪譞；胡瑞成；戴爱国；谭双香
来源：国际呼吸杂志 2012 年 32卷 8期
