目的 探讨Hippo通路对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)分化、增殖、迁移能力的调控效应.方法 采用直接贴壁法分离培养C57BL/6小鼠原代BMSCs,取第6~7代细胞,通过流式细胞仪检测和诱导其成骨、成软骨、成脂分化并进行鉴定,通过非接触共培养诱导BMSCs向AECⅡ细胞分化.通过2 -脱氧- D -葡萄糖(2-DG)及哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)抑制剂9E1调节Hippo通路,用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测2-DG及9E1对BMSCs表面活性蛋白(SPB、SPC和SPD)mRNA和表面活性蛋白C前体(pro-SPC)蛋白表达的影响,以评估Hippo通路对BMSCs向AECⅡ细胞分化的作用;用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测BMSCs的数量变化(用0.1、0.5、1.0、5.0 mmol/L的2-DG干预),以评估Hippo通路对BMSCs增殖能力的影响;用划痕实验及Transwell小室迁移实验评估Hippo通路对BMSCs水平迁移及向急性呼吸窘迫综合征(ARDS)肺组织归巢能力的影响.结果 2-DG呈浓度依赖性激活Hippo通路并促进BMSCs向AECⅡ细胞分化及增殖,其效应在2-DG浓度5 mmol/L时最为明显〔SPB mRNA(2-ΔΔCT):2.42±0.28比1.89±0.11,SPC mRNA(2-ΔΔCT):8.06±0.68比6.59±0.79,SPD mRNA (2-ΔΔCT):6.45±0.37比5.27±0.28,pro-SP
作者:李朗;董亮;陈意喆;惠姣洁
来源:中华危重病急救医学 2019 年 31卷 6期