目的 建立一种检测副溶血性弧菌(Vp)快速且特异的环介导等温扩增(LAMP)检测方法.方法 针对副溶血性弧菌小耐热溶血素(tlh)基因特异性序列的6个位点设计4条LAMP引物,65℃保温约60 min,完成对副溶血性弧菌的扩增,扩增产物经肉眼、SYBR Green I染色、电泳和酶切鉴定.利用I.AMP和普通PCR方法同时检测1株副溶血性弧菌和12株非副溶血性弧菌来验证LAMP方法的特异性;将副溶血性弧菌菌液作一系列lO倍稀释后用LAMP和PCR方法进行检测,比较两者敏感性.结果 1株副溶血性弧菌出现LAMP扩增反应:通过肉眼、SYBR Green I染色和电泳均能观察到LAMP扩增产物的出现,酶切证实了 LAMP产物的特异性;12株非副溶血性弧菌未出现LAMP扩增.LAMP检测tlh基因的特异性和敏感性与普通PCR相同,LAMP检测tlh基因的检测下限为15 cfu/mL.结论 建立了一种快速、敏感、特异的副溶血性弧菌检测方法,适合日常监测及快速榆测的需要.
作者：张如胜；宋克云；苏良；魏泉德
来源：国际检验医学杂志 2009 年 30卷 3期
