目的：应用小干扰RNA（siRNA）技术抑制产肠毒素大肠杆菌（ETEC）LT 基因的表达。方法针对 LT基因设计siRNAs序列，在ETEC培养过程中，将针对LT的siRNA、非特异性对照siRNA、阴性对照siRNA和LB培养基分别加入siRNA组（siRNA‐LT1组、siRNA‐LT2组）、siRNA‐coa3组、siRNA‐NC组和空白对照组，分3个时间点加入，每次1 nmol。在首次加入siRNA后45 min（A时间点）、90 min（B时间点）、135 min（C时间点）留取菌液，应用实时荧光定量PCR检测上述3个时间点5组LT mRNA的表达水平。应用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测siRNA‐LT1组、siRNA‐LT2组和空白对照组在3个时间点的LT蛋白表达水平。结果实时荧光定量PCR结果显示，siRNA‐LT1在A、B、C 3个时间点对LT mRNA表达的抑制率分别为70．9％、70．1％、72．5％，siRNA‐LT2在A、B、C 3个时间点对LT mRNA表达的抑制率分别为70．1％、69．2％、70．5％，siRNA‐LT1组、siRNA‐LT2组对LT mRNA表达的抑制率与相应处理时间的siRNA‐NC组、siRNA‐coa3组、空白对照组比较差异均有统计学意义（P＜0．05）。Western Blot结果显示，siRNA‐LT1和siRNA‐LT2在A、B、C 3个时间点对LT蛋白表达的抑制率分别为43．1％、18．4％、5．0％和38．2％、15．4％、30．1％。结论

作者：付瑞；刘华；段勇；王玉明；单斌

来源：国际检验医学杂志 2015 年 8期