目的 建立适用于结直肠癌患者粪便标本肿瘤型M2丙酮酸激酶(M2-PK)DNA检测的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法,分析自建方法的临床应用价值.方法 采用PCR方法扩增肿瘤型M2-PK DNA片段(162 bp),纯化后采用TA克隆法转入PGM-T载体,构建重组质粒.以重组质粒为模板,建立实时荧光定量PCR检测方法,评价自建方法的敏感性、特异性和重复性.选择2014年1月至2016年6月确诊的结直肠癌患者200例,同期体检健康者100例,采用自建方法对受试者粪便和血清标本进行肿瘤型M2-PK DNA检测,并与酶联免疫吸附法肿瘤型M2-PK检测结果进行比较.结果 测序结果证实重组质粒构建成功.自建方法检测肿瘤型M2-PK DNA的灵敏度为10 copy/mL,对肌肉型M2-PK DNA和M1型丙酮酸激酶(M1-PK)DNA检测结果为阴性,批内及批间变异系数为0.3
作者：刘玉兰；何凤屏；徐新；吴青松；李定云；马占忠；郭艳乐；唐盛；尹卫东；龚海涛；刘艺；林恒先
来源：国际检验医学杂志 2017 年 38卷 11期
