选取结核分枝杆菌潜伏相关抗原Rv2029c、结核分枝杆菌优秀抗原Ag85A和Rv3425，构建针对潜伏感染的结核分枝杆菌DNA疫苗pVAX1／Ag85A-Rv3425-Rv2029c （A39），并对其免疫原性进行研究。首先用聚合酶链反应（PCR）扩增Ag85A基因，构建重组质粒pVAX1／Ag85A （A）；PCR扩增 Ag85A-Rv3425连接片段，插入pVAX1载体，构建重组质粒pVAX1／Ag85A-Rv3425（A3）；PCR扩增Rv2029c基因，插入A3，构建重组质粒pVAX1／Ag85A-Rv3425-Rv2029c （A39）。将构建成功的重组质粒转入 HEK293T细胞，蛋白免疫印迹法验证质粒在真核细胞中得到表达。在大肠埃希菌BL21中成功表达和纯化去除信号肽的Ag85A、Rv3425和Rv2029c蛋白。用质粒免疫C57BL／6小鼠，共分为5组：PBS、pVAX1、A、A3和A39组，采用电脉冲导入免疫，每2周免疫1次，共3次，用酶联免疫斑点检测（ELISPOT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、流式细胞术等方法检测细胞免疫和体液免疫水平。结果显示，A39免疫小鼠后，能引发强烈的细胞免疫反应﹝γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素2（IL-2）高水平分泌﹞，外周血CD4＋／CD8＋ T细胞比值增加，CD8＋穿孔素＋ T细胞比例增加。结果表明，构建的A39 DNA疫苗能引发强烈的免疫反应，显示出良好的抗结核潜
作者：宋娜；李光华；黄琪；孔聪；王洪海；徐颖
来源：微生物与感染 2015 年 1期
