为构建结核分枝杆菌毒素‐抗毒素系统 m azEF6缺失突变株，并对其表型进行初步探讨，首先用聚合酶链反应（PCR）分别从H37Rv标准株和PUC‐19K质粒扩增出 mazEF6基因的同源臂及卡那霉素抗性基因kan ；然后应用融合PCR技术将 mazEF6基因的同源臂与 kan基因进行杂交拼接，获得目的融合片段，将该融合片段克隆于pMD‐19T（simple）载体形成自杀质粒pMD‐19T‐ΔmazEF6‐kan ，并将自杀质粒转化至大肠埃希菌DH5α中；最后利用电穿孔技术将自杀质粒电转至H37Rv标准株中，在卡那霉素抗性改良罗氏培养基上筛选H37Rv ΔmazEF6缺失突变株单个菌落，提取阳性菌株全基因组DNA为模板，PCR扩增克隆片段并测序。将所获得的H37Rv ΔmazEF6缺失突变株进行遗传稳定性检测后，对其表型进行初步研究。结果显示，该缺失株在15代内未发生回复性突变；与野生株相比，缺失株生长速度缓慢且细菌形态短小。本研究证实，融合PCR技术便于快速获得结核分枝杆菌缺失突变株；结核分枝杆菌在缺失毒素‐抗毒素系统 m azEF6基因后生存能力下降，这为进一步研究毒素‐抗毒素系统的作用奠定了基础。
作者：申爱平；曹帅丽；邢建新；袁俐
来源：微生物与感染 2015 年 3期
