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目的:筛选人血白蛋白(HSA)免疫优势抗原表位,为建立一种高特异性HSA制品快速检测方法提供基础。方法采用生物信息学方法比较人与其他物种(猪、马、牛、羊)白蛋白基因序列并预测其抗原表位,获得HSA免疫优势抗原表位;利用大肠杆菌优势密码子获得相应基因,插入PGEX-4T-2载体克隆表达得到重组HSA表位抗原;间接ELISA评价上述重组表位的特异性。结果筛选3个HSA抗原表位,分别位于H1〔126~162氨基酸(aa)〕、H2(314~355aa)、H3(373~424aa),获得相应基因片段;得到重组抗原的相对分子质量(Mr)分别为3.01×104、3.06×104和3.17×104;抗原活性检测显示373~424aa序列表位具有较高活性,其酶标抗体竞争抑制反应的IC50为1.635 mg/L,高于酶标HSA抗体。结论实验获得了特异性HSA免疫优势抗原表位,对研制一种快速、特异的HSA检测试剂具有重大意义。

作者:李婷婷;修冰水;郭兴道;张癸荣

来源:国际药学研究杂志 2016 年 43卷 5期

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作者:
李婷婷;修冰水;郭兴道;张癸荣
来源:
国际药学研究杂志 2016 年 43卷 5期
标签:
人血白蛋白 免疫优势抗原表位 间接ELISA human serum albumin immunodominant epitope indirect ELISA
目的:筛选人血白蛋白(HSA)免疫优势抗原表位,为建立一种高特异性HSA制品快速检测方法提供基础。方法采用生物信息学方法比较人与其他物种(猪、马、牛、羊)白蛋白基因序列并预测其抗原表位,获得HSA免疫优势抗原表位;利用大肠杆菌优势密码子获得相应基因,插入PGEX-4T-2载体克隆表达得到重组HSA表位抗原;间接ELISA评价上述重组表位的特异性。结果筛选3个HSA抗原表位,分别位于H1〔126~162氨基酸(aa)〕、H2(314~355aa)、H3(373~424aa),获得相应基因片段;得到重组抗原的相对分子质量(Mr)分别为3.01×104、3.06×104和3.17×104;抗原活性检测显示373~424aa序列表位具有较高活性,其酶标抗体竞争抑制反应的IC50为1.635 mg/L,高于酶标HSA抗体。结论实验获得了特异性HSA免疫优势抗原表位,对研制一种快速、特异的HSA检测试剂具有重大意义。