目的:利用针对兰尼碱受体1(Ryanodine receptor 1,RyR1)的小干扰RNA(siRNA),研究沉默RyR1基因表达对人肺癌细胞株A549细胞生物学活性的影响.方法:(1)设计并合成针对RyR1基因的siRNA及阴性对照片段(不针对任何已知人的mRNA)和阳性对照片段(沉默GAPDH内参基因),转染肺癌细胞A549;(2)实时荧光定量-PCR(Real-time fluorogentic quantitative PCR,FQ-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)分别检测转染后RyR1 mRNA表达及RyR1蛋白表达的变化;(3)MTT实验检测转染前后细胞增殖能力的变化;(4)流式细胞术检测转染前后细胞周期及细胞凋亡的状态.结果:(1) FQ-PCR结果显示RyR1 siRNA-1969可下调RyR1 mRNA的表达,相对表达量与阳性对照组和阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);(2)转染RyR1 siRNA后RyR1蛋白表达下调;(3)MTT实验显示RyR1表达沉黙后的A549细胞生长缓慢,与对照组相比较差异有统计学意义(P＜0.05);(4)转染后细胞凋亡率较空白对照组(正常培养的A549细胞)和阴性对照组(转染阴性对照小RNA片段的A549细胞株)显著增高(P＜0.001),处于G0～G1期的细胞明显增多(P＜0.001).结论:RyR1基因可能为肺癌的基因治疗提供新策略.
作者：薄龙；潘泓；赵冰冰；黄明方；刘德森
来源：广西医科大学学报 2013 年 30卷 6期
