提高重组腺病毒载体提纯和滴定效率的研究-临床诊疗知识库

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作者：

邓祥发；郭灵；林丹；曾庆堂；磨洁琳；韦力；蓝玲

来源：

广西医学 2006 年 28卷 1期

标签：

腺病毒载体 β-半乳糖苷酶基因病毒提取病毒纯化空斑形成单位

目的探讨提取、纯化和滴定重组腺病毒表达载体的有效方法.方法将已用含报告基因β-半乳糖苷酶基因(LacZ)的重组5型腺病毒载体(Ad5CMVLacZ)转染的人胚肾293细胞从-70℃转移至37℃,反复冻融使细胞发生破溃,病毒从细胞内释放至上清液.在上清液中加入氯化铯,进行密度梯度超速离心,收集和透析病毒液,用空斑形成实验确定病毒的滴度.结果经提取和纯化的Ad5CMVLacZ病毒液清晰无色,用系列稀释法将其配制成10-2～10-13的稀释度,分别转染100

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