目的:探讨蛋白质非酶糖基化终产物(AGEs)作用下人足细胞自噬和凋亡发生情况及可能的信号转导通路.方法:体外培养永生化人足细胞,以AGEs 100 mg/L分别不同时间(0、4、8、12、24 h)刺激足细胞.Western blotting检测足细胞自噬标记性蛋白微管相关蛋白1B轻链3-II/I(LC3-II/I)、自噬相关基因Atg5、哺乳动物雷帕霉素靶点受体(mTOR)信号通路相关蛋白p70 S6激酶1(p-p70 S6 Kinase,p70 S6 Kinase)表达水平;荧光显微镜观察自噬溶酶体形成标志蛋白溶酶体膜蛋白(LAMP2a);AnnexinⅤ/7-AAD双染流式细胞术检测足细胞早期和晚期凋亡.结果:①与0 h相比,100 mg/L AGEs刺激后足细胞LC3B-II/I表达水平在4、8、12、24 h均明显下降(P<0.05);Atg5蛋白表达水平在8、12、24 h均明显下降(P<0.05),在12 h下降达到最高峰;p-p70 S6 Kinase水平在4、8、12 h升高(P<0.05),在12 h达峰,在24 h再次下降;②免疫荧光染色结果显示,与0 h相比,100 mg/L AGEs刺激足细胞12 h LAMP2a表达明显减少;③与0 h相比,100 mg/L AGEs刺激后足细胞发生早期凋亡+晚期凋亡比例在4、8、12、24 h逐渐增加(P<0.05),在12 h达峰(14.07
作者：陈结慧；祝胜郎；叶玲；朱恒梅；蒋莹；李就鸿
来源：广州医科大学学报 2016 年 44卷 5期
