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目的 探讨巨噬细胞在糖尿病肾病(DN)足细胞凋亡中的作用及其机制.方法 体外培养小鼠巨噬细胞系(RAW264.7),将其分为3组:正常葡萄糖组(NC)、甘露糖组(Man)、高葡萄糖组(HG),并收集上述NC组巨噬细胞上清液(NC-CM)和HG组巨噬细胞上清液(HG-CM).采用Western印迹和免疫荧光染色检测M1型巨噬细胞标志物iNOS和M2型巨噬细胞标志物MR表达,ELISA检测巨噬细胞上清液中TNF-α水平.体外培养小鼠永生系足细胞MPC5,将其分为以下几组:正常葡萄糖对照组(NC)、NC-CM组、HG-CM组、HG-CM+ROS抑制剂组(HG-CM+Tempo)、HG-CM+p38MAPK抑制剂组(HG-CM+SB203580)、HG-CM+抗TNF-α中和抗体组(HG-CM+TNF-α neutralizing antibody)、HG-CM+中和抗体对照剂IgG组(HG-CM+IgG)、重组小鼠TNF-α组.采用Annexin V-FITC/PI和Hoechst33342染色检测足细胞凋亡率,DCFH-DA染色检测足细胞ROS水平,Western印迹检测足细胞cleaved casepase-3、p38MAPK和p38MAPK磷酸化水平(p-p38MAPK)表达.结果 (1)与对照组相比,HG组巨噬细胞iNOS表达明显增加,MR表达降低,呈促炎性M1型活化.(2)正常对照组与NC-CM组组间足细胞凋亡、cleaved casepase-3、ROS及p-p38MAPK表达差异无统计学意义.与对照组和NC-CM组相比,HG-CM组足细胞凋亡、cleaved casepase-3、ROS及p-p38M

作者:郭银凤;赵宇;姜彧滕;朱小东;刘必成;张晓良

来源:中华内分泌代谢杂志 2017 年 33卷 8期

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作者:
郭银凤;赵宇;姜彧滕;朱小东;刘必成;张晓良
来源:
中华内分泌代谢杂志 2017 年 33卷 8期
标签:
巨噬细胞 足细胞 细胞凋亡 糖尿病肾病 Macrophage Podocytes Apoptosis Diabetic nephropathy
目的 探讨巨噬细胞在糖尿病肾病(DN)足细胞凋亡中的作用及其机制.方法 体外培养小鼠巨噬细胞系(RAW264.7),将其分为3组:正常葡萄糖组(NC)、甘露糖组(Man)、高葡萄糖组(HG),并收集上述NC组巨噬细胞上清液(NC-CM)和HG组巨噬细胞上清液(HG-CM).采用Western印迹和免疫荧光染色检测M1型巨噬细胞标志物iNOS和M2型巨噬细胞标志物MR表达,ELISA检测巨噬细胞上清液中TNF-α水平.体外培养小鼠永生系足细胞MPC5,将其分为以下几组:正常葡萄糖对照组(NC)、NC-CM组、HG-CM组、HG-CM+ROS抑制剂组(HG-CM+Tempo)、HG-CM+p38MAPK抑制剂组(HG-CM+SB203580)、HG-CM+抗TNF-α中和抗体组(HG-CM+TNF-α neutralizing antibody)、HG-CM+中和抗体对照剂IgG组(HG-CM+IgG)、重组小鼠TNF-α组.采用Annexin V-FITC/PI和Hoechst33342染色检测足细胞凋亡率,DCFH-DA染色检测足细胞ROS水平,Western印迹检测足细胞cleaved casepase-3、p38MAPK和p38MAPK磷酸化水平(p-p38MAPK)表达.结果 (1)与对照组相比,HG组巨噬细胞iNOS表达明显增加,MR表达降低,呈促炎性M1型活化.(2)正常对照组与NC-CM组组间足细胞凋亡、cleaved casepase-3、ROS及p-p38MAPK表达差异无统计学意义.与对照组和NC-CM组相比,HG-CM组足细胞凋亡、cleaved casepase-3、ROS及p-p38M