目的:克隆人尼古丁受体α5亚单位(CHRNA5),以野生型CHRNA5为模板,通过定点突变法构建CHRNA5突变体(Asn398)慢病毒真核表达载体,为Asn398功能研究提供基础.方法:RT-PCR克隆CHRNA5基因片段,运用重叠延伸PCR法进行定点突变,定向克隆至EX-Q0146-LV201,序列分析鉴定野生及突变重组子,将CHRNA5突变体Asn398及未突变体定向克隆到EX-Q0146-LV201慢病病毒表达质粒上.并转染至HEK293T细胞中,RT-PCR检CHRNA5 mRNA表达,Westernblot检测其蛋白表达.结果:重组子目的基因的序列分析结果显示成功克隆CHRNA5 cDNA基因,并成功将CHRNA5第398位氨基酸天冬氨酸(Asp)转变为天冬酰胺(Asn),突变体及未突变在转染细胞中均获得CHRNA5 mRNA及蛋白表达.结论:成功构建CHRNA5突变体Asn398慢病毒表达载体,证实其在293细胞中有mRNA转录及其蛋白表达,为下一步进行功能研究奠定基础.
作者：赵祝香；彭芳；何桦；李裕军；赵子文
来源：广州医科大学学报 2017 年 45卷 2期
