目的:以绿色荧光蛋白(GFP)基因为报告基因,将GFP基因克隆入pUC18建立大通量的筛选载体.方法:用PCR方法扩增目的DNA片段,碱裂解法小量制备质粒DNA,用限制性内切酶消化质粒DNA,用低熔点琼脂糖凝胶分离和纯化大片段DNA,GFP基因与pUC18连接,用氯化钙法转化感受态细胞,DNA序列测定,琼脂糖凝胶电泳,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳.结果:pUC18-atg-GFP载体意外表达GFP蛋白,新合成的上游引物与原下游引物扩增GFP基因,克隆入pUC18构建pUC18-GFP载体,通过PCR、酶切鉴定和DNA序列分析,GFP基因的读码框架与原设计方案完全一致,该载体自身无GFP表达.结论:筛选载体内的GFP基因与克隆基因的融合基因可表达一种融合蛋白,在琼脂平板上含有该融合基因的克隆在紫外线激发下可发绿色荧光,因此,可表达基因能被挑选出来.
作者：王进；李付广；李倩如；杜英
来源：郑州大学学报(医学版) 2002 年 37卷 5期
