目的:利用Tet-on 基因表达调控系统建立由强力霉素(Dox)诱导TAp63γ基因表达的EC9706细胞系,为进一步研究TAp63γ基因的功能奠定基础.方法:将调控质粒pTet-on 转入EC9706细胞,经G418筛选后的细胞再次转染反应质粒pTRE-TAp63γ-HA,再用潮霉素筛选出阳性细胞克隆,RT-PCR法选择对Dox敏感的细胞克隆.最后用不同浓度Dox诱导,Western blot法确定Dox的最佳诱导浓度.采用此浓度的Dox分别诱导EC9706、EC9706/Tet/pTRE、EC9706/Tet/pTRE-TAp63γ 3组细胞,细胞增殖分析试剂盒(CCK-8试剂盒)检测细胞生长抑制率.结果:Dox浓度为3 mg/L时可诱导TAp63γ基因高表达,EC9706/Tet/pTRE-TAp63γ细胞的生长抑制率均高于EC9706和EC9706/Tet/pTRE细胞(P＜0.05或0.01).结论:成功构建了Tet-on 调控TAp63γ基因表达的EC9706 细胞系,为进一步研究食管鳞癌细胞内P63蛋白的生物学行为提供了一个理想的研究平台.TAp63γ基因表达可使EC9706细胞增殖受到抑制.
作者：范天黎；侯桂琴；许培荣；袁保梅；杨静；刘兰琦；杨观瑞
来源：郑州大学学报（医学版） 2007 年 42卷 2期
