本实验应用Tet-On基因表达系统,通过强力霉素调控血小板生成素(TPO)基因在CHO细胞中的表达.应用DNA重组技术,构建质粒pTRE-TPO.应用脂质体介导的基因转染技术,pTRE-TPO与pTK-Hyg共转染CHO-Tet-On细胞株,得到双稳定细胞株CHO-Tet-On-TPO,并筛选高表达、低背景克隆.当培养基中不加强力霉素时,RT-PCR和Western印迹未见TPO表达,ELISA测定培养上清TPO水平为0.1μg/L.当培养基中加入2mg/L强力霉素时,RT-PCR和Western印迹可见TPO表达条带,ELISA测定培养上清TPO水平为10.8μg/L,两者相差108倍.本试验通过强力霉素调控TPO基因在CHO细胞中的表达,有望为TPO基因治疗提供一条可控的安全途径.
作者：伏爽；魏旭东；程康；陆爱丽；王申五；王德炳
来源：中国实验血液学杂志 2000 年 8卷 1期
