目的:构建Cyclin E基因干扰载体,转染食管癌EC9706细胞,观察其对Cyclin E基因表达的影响.方法:设计、合成靶向Cyclin E基因siRNA,退火成双链后与pRNAT-CMV3.1/Neo载体连接.转染EC9706细胞后,倒置荧光显微镜下观察细胞转染效果,RT-PCR、Western-blot分别检测Cyclin E基因mRNA和蛋白表达水平.结果:构建的2个Cyclin E基因siRNA载体插入序列与所设计序列均一致;转染EC9706细胞后,干扰1组、干扰2组与无关siRNA对照组均产生绿色荧光,空白对照组无荧光产生.干扰1组、干扰2组与空白对照组和无关siRNA对照组Cyclin E mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义(F=15.381,P=0.002),且干扰1组、干扰2组与空白对照组和无关siRNA对照组比较,Cyclin E mRNA相对表达量均降低(P均<0.05).结论:构建的靶向Cyclin E基因RNA干扰载体能有效抑制转染细胞Cyclin E基因的表达.
作者：王娜；冷弘；李敏；臧文巧；王媛媛
来源：郑州大学学报(医学版) 2013 年 48卷 2期
