目的:建立敲除DNA聚合酶β( DNA polβ)基因的人食管癌Eca 9706细胞株,观察基因敲除细胞生物学行为的变化。方法:采用同源重组基因敲除方法,首先构建食管癌Eca9706细胞DNA polβ基因敲除载体,并将其导入Eca9706细胞,构建DNA polβ基因敲除细胞株。 PCR、RT-PCR、Western blot法检测DNA polβ基因敲除区段DNA存在及表达情况。流式细胞术和MTT法检测基因敲除细胞的细胞周期和生长速度。结果:筛选得到具有neo抗性的DNA polβ基因敲除Eca9706细胞,其基因组中DNA polβ基因区段已被敲除;RT-PCR和Western blot 检测不到DNA polβmRNA和蛋白表达。敲除DNA polβ基因的细胞生长速度缓慢,G2~M期细胞增多,S期细胞减少( t=3.882、3.869,P均<0.05)。结论:成功构建了食管癌Eca9706 DNA polβ基因敲除细胞模型。
作者:冯龙;郭文涛;路武豪;孙萨迦;董子明
来源:郑州大学学报(医学版) 2014 年 5期