目的：筛选可靶向沉默转化生长因子β1（TGF－β1）表达的短发夹RNA（shRNA）。方法：设计和制备靶向沉默TGF－β1的5条shRNA，并构建靶向沉默TGF－β1的p－Genesil－shRNA真核表达重组质粒及含无关shRNA的 p－Genesil－1－shRNA－vect对照质粒，酶切和测序方法进行鉴定。通过脂质体介导分别将p－Genesil－1－shRNA－vect质粒和各重组表达质粒转染入高糖或AngⅡ环境激活的HKC细胞（分别命名为p－Genesil－1－vect细胞及p－Genesil－shRNA 1～5细胞），Western blot方法检测沉默TGF－β1表达的效果。结果：酶切和测序结果显示，5种重组质粒均可切出与预计相符的目的片段，所有shRNA编码序列与设计一致。与HKC细胞相比，高糖或AngⅡ刺激的HKC细胞和p－Genesil－1－vect细胞中TGF－β1表达均增高（F＝74．188，P＜0．001），而后二者之间TGF－β1表达差异无统计学意义（P＞0．05）。与高糖或AngⅡ刺激的p－Genesil－1－vect细胞相比，高糖或AngⅡ刺激的各组p－Genesil－shRNA细胞中TGF－β1表达均降低（F＝139．695，P＜0．001）。结论：筛选出1条可靶向沉默TGF－β1表达的shRNA。
作者：李敏；李新强；付琳琳；吴余；王虹；唐小燕；付素珍
来源：郑州大学学报（医学版） 2015 年 1期
