目的:获取结核分枝杆菌mpt59和esxA基因编码的原核表达融合蛋白,并将该蛋白初步用于结核患者的快速诊断。方法:PCR扩增含有柔性链接肽段的esxA核苷酸序列,并将其连接至原核表达载体pET28a上,再将mpt59连接至pET28a-esxA上。该融合蛋白在大肠杆菌BL21中原核表达后,用镍珠子进行亲和纯化。采用垂直电泳和免疫印迹分析重组蛋白,并用于结核患者的诊断。结果:成功构建了原核表达载体pET28a-esxA-mpt59,转化大肠杆菌BL21后经诱导产生了高水平的表达产物。用该纯化蛋白进行ELISA检测,结果表明其诊断结核的灵敏度为97.8%,特异度为100%。结论:构建了含mpt59和esxA融合抗原基因的原核表达载体,并诱导表达了融合蛋白,为进一步研究结核分枝杆菌疫苗或诊断试剂奠定了基础。
作者:石洁;朱岩昆;郑丹薇;马晓光;王少华;李辉;邢进;吴彩霞
来源:郑州大学学报(医学版) 2015 年 6期