目的 构建结核分枝杆菌锌离子依赖的金属蛋白酶1(Zmp1)基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达.方法 以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,采用PCR法扩增Zmp1基因;定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)的多克隆位点中,构建重组原核表达质粒pET-32a(+)-Zmp1;转化入大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Westernblot法鉴定.结果 PCR法扩增出Zmp1基因;重组表达质粒经双酶切及基因测序鉴定构建正确;表达的重组Zmp1融合蛋白相对分子质量(Mr)约为94 000,大小与预期融合蛋白一致;重组Zmp1融合蛋白可与His标签单克隆抗体特异性结合.结论 成功构建了Zmp1基因原核表达载体,并在大肠杆菌BL21 (DE3)中获得重组Zmp1融合蛋白表达.
作者：张继明；杨春；何永林；穆柳青；张春燕；樊宇；徐蕾
来源：细胞与分子免疫学杂志 2014 年 30卷 6期
