目的 原核表达、纯化结核杆菌热休克蛋白Acr2分子,并分析其免疫反应性.方法 采用PCR法扩增结核杆菌Acr2基因,并构建重组表达质粒PET22b-Acr2,转化大肠埃希菌BL21(DE3)菌株,并用IPTG诱导Acr2蛋白表达.以及使用镍离子亲和层析柱纯化该表达产物,并通过Western blot检测其免疫反应性.结果 PCR、双酶切和测序结果均表明PET22b-Acr2重组质粒构建成功,其在大肠埃希菌中主要以包涵体蛋白形式进行表达.复性后的包涵体蛋白经镍离子亲和层析柱纯化后,可获得纯化的Acr2重组蛋白,该重组蛋白分子质量约为18.3ku,与结核分枝杆菌Acr2蛋白的理论预测值相符.经Western blot检测显示该重组蛋白能被结核病人血清特异性识别.结论 原核表达质粒PET22b-Acr2被成功构建,以及Acr2重组蛋白被有效进行表达和纯化,从而为进一步研究其生物学功能奠定了基础.
作者：陈勇；陈竹；张奇声；左益亮；张灿；李子昂；陈乔；夏惠
来源：热带病与寄生虫学 2017 年 15卷 3期
