目的 构建结核分枝杆菌热休克蛋白X(heat shock protein X,HspX)基因与EGFP融合基因的真核表达载体pEGFP-N 1-HspX,并在小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7中表达.方法 以结核分枝杆菌(H37Rv)基因组DNA为模板,PCR扩增HspX基因,定向插入至质粒pEGFP-N1的多克隆位点,经酶切及测序鉴定正确后,将质粒pEGFP-N l-HspX转染RAW264.7细胞,荧光显微镜下观察GFP的表达,Real-time PCR及Westem blot法鉴定HspX基因的表达.结果 质粒pEGFP-N 1-HspX经酶切及测序鉴定,证明构建正确;质粒pEGFP-N 1-HspX转染24 h后,荧光显微镜下可见GFP表达,表达的重组融合蛋白Flag-HspX相对分子质量约43 000;转染组细胞中HspX基因mRNA水平明显高于空载体组(P＜0.01).结论 成功构建了pEGFP-N 1-HspX融合基因真核表达载体,并在RAW264.7细胞中获得表达.
作者：张继明；徐苏娟
来源：中国生物制品学杂志 2016 年 29卷 10期
