目的 构建锌依赖的金属蛋白酶1(zmp1)基因的真核表达质粒,探讨其对巨噬细胞凋亡的影响.方法 以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,采用PCR法扩增zmp1基因;克隆到真核表达质粒pEGFP-N1的多克隆位点中,构建真核表达质粒pEGFP-N1-zmp1并转染RAW264.7细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,实时定量PCR(qRT-PCR)检测zmp1 mRNA的水平;藻红蛋白标记的膜联素V/7-氨基放线菌素D(annexinV-PFE/7-AAD)双染色结合流式细胞术检测Zmp1蛋白对细胞凋亡影响.结果 扩增出zmp1基因;真核表达质粒经过XhoⅠ和BamH Ⅰ双酶切及基因测序鉴定构建成功;转染细胞24h后,经荧光倒置显微镜观察到绿色荧光;qRT-PCR结果显示转染pEGFP-N1-zmp1的RAW264.7细胞zmp1 mRNA的表达显著升高;转染后48 h,细胞早期凋亡率有所增加.结论 在RAW264.7细胞中成功表达了Zmp1并能促进巨噬细胞凋亡.
作者：李鹏；何永林；张继明；方陈城
来源：细胞与分子免疫学杂志 2015 年 31卷 12期
