目的:探讨导入外源性p16cDNA真核表达载体对人原发性肝癌细胞系SMMC-7721生物学行为的影响及其分子机制.方法:构建外源性p16基因真核表达载体并转染SMMC-7721细胞,经G418抗性筛选和扩增,得到稳定的表达株,并经RT-PCR及免疫细胞化学鉴定.通过生长曲线,流式细胞术,免疫细胞化学及Western-Blot等实验方法,对转基因后肿瘤细胞生物学行为及细胞周期调控因子CDK4,Cyclin D1及pRb进行观察.结果:转染外源性p16基因的SMMC-7721细胞有外源性p16基因的整合及表达,细胞生长速度明显减慢,倍增时间明显延长,G1期细胞明显多于转基因前(P＜0.05);免疫细胞化学显示外源性p16表达可下调CDK4及cylin D1的表达(P＜0.05),Western-Blot提示转染外源性p16基因后细胞中磷酸化pRb表达明显降低.结论:外源性p16基因导入人肝癌细胞株SMMC-7721中可稳定表达并使细胞停滞在G1期,抑制细胞生长,其机制可能为下调CDK4、cyclin D1的表达和抑制pRb磷酸化有关.
作者：罗春华；朱建思；苏影；周建国；董琳
来源：湖南师范大学学报（医学版） 2005 年 2卷 1期
