目的：克隆和表达结核分枝杆菌ESAT-6。方法：以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板，利用聚合酶链式反应(PCR)扩增esat-6基因片段，克隆至pMD18-T载体，PCR筛选阳性克隆并测序。将esat-6基因亚克隆至pET-28a，构建pET-esat-6重组质粒，转化入大肠杆菌BL21感受态，PCR和双酶切鉴定阳性克隆，经IPTG诱导表达，用His-bindTM亲和层析柱纯化ESAT-6，SDS-PAGE和Western blotting鉴定。结果：PCR扩增出esat-6基因的特异片段，成功构建重组表达质粒pET-esat-6，并在BL21获得表达，纯化的ESAT-6能被结核病人血清所识别。结论：成功克隆和表达获得重组蛋白ESAT-6。
作者：袁仕善；邓志高；谭云洪；杨双；王云；孙文霞
来源：湖南师范大学学报（医学版） 2013 年 3期
