目的：构建人Grn基因原核表达载体并观察其表达。方法：从人单核细胞系THP-1细胞cDNA中扩增出Grn片段，通过酶切与连接，将Grn片段构建到pGEX-4T-2质粒载体上，再转化入感受态细胞TOP10，菌落PCR鉴定阳性克隆并测序分析，测序正确的重组质粒再转化入感受态细胞DE3中表达蛋白，用Western blot鉴定结果。结果：构建的pGEX-4T-2表达载体作PCR和双酶切鉴定，证实其中有目的片段完整插入，插入片段测序结果与Grn序列设计完全一致，将其转化入DE3中，Western blot结果表明在细菌裂解上清有分子质量为91KD的融合蛋白。结论：重组人Grn的克隆与表达成功，为进一步研究Grn的功能奠定了基础。
作者：谌思；粟艳林；李悦；彭小宁
来源：湖南师范大学学报（医学版） 2015 年 1期
