目的 筛选出增生型胸腺组织重症肌无力(myasthenia gravis,MG)相关蛋白,并对其作出鉴定.方法 分别利用异体MG患者血清、正常人血清和自身免疫病患者血清为第一抗体,与电泳转移到硝酸纤维素膜上的蛋白点孵育,做Western Blotting试验;然后在利用双向电泳技术获得的参考凝胶上挖取MG组特异显色点所对应的蛋白质点,经胰蛋白酶胶内酶切,对所得多肽混合物进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorptionionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析,得到肽质量指纹图谱(peptide mass fingerprinting,PMF)数据,登陆http://prospector.ucsf.edu/ucs fhtml4.0/msfit.htm网站,用MS Fit程序在NCBInr.10.13.2004数据库检索,鉴定蛋白质.结果 Western Blotting试验共获得5个MG特异显色点,编号为2、4、6、7、9;经质谱分析得到5个蛋白质PMF图谱,数据库检索这些蛋白分别为:2号蛋白点isopeptidaseT、4号蛋白点importin beta subunit和6号蛋白点SOUL protein.7号和9号蛋白点未能得到确认,需要更换检索条件或进行蛋白质测序才能进一步认定.结论 运用蛋白质组学和Western Blotting研究方法,共获得5个MG相关蛋白,得到鉴定的三个蛋白分别为2号蛋白点isopeptidaseT、4号蛋白点importi
作者:高峰;程豪为;崔新征;郭亮;杜英;张清勇
来源:中国实用神经疾病杂志 2006 年 9卷 6期