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目的:探讨靶向HMGB1的shRNA对HMGB1表达改变的影响及其与子宫内膜癌细胞侵袭与迁移力改变的关系.方法:运用RNA干扰技术,构建HMGB1短发夹RNA(pshRNA-1 /HMGB1,pshRNA-2/HMGB1,pshRNA-3/HMGB1),同时设置转染非特异性质粒的阴性对照组(HMGB1/p-NC)和脂质体转染组(Lipo组),用脂质体法转染人子宫内膜癌细胞(HEC-1A),利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测转染后48 h各组细胞HMGB1在mRNA和蛋白水平的表达,Transwell小室法观察转染HMGB1 shRNA后HEC-1A细胞的侵袭情况,细胞划痕实验观察转染HMGB1 shRNA后HEC-1A细胞的迁移情况.结果:RT-PCR显示:3组重组质粒HMGB 1-pshRNAs转染后,HMGB1 mRNA相对表达水平分别是0.192±0.006,0.055±0.002和0.123±0.086,较Lipo组(0.268±0.008)和HMGB1/p-NC组(0.270±0.004)明显减少(P<0.05),最大抑制率分别达28.4%,79.5%和54.1%.Western印迹显示:HMGB1蛋白相对表达水平分别是0.259±0.129.0.032±0.002和0.104±0.007,较Lipo组(0.347±0.007)和HMGB1/p-NC组(0.349±0.007)明显减少(P<0.05),最大抑制率分别达25.4%,90.8%和70.0%.实验组在接种后48 h,穿过Transwell小室膜的细胞数显著少于HMGB1/p-NC组和Lipo组(P<0.05).划痕愈合实验亦显示实验组划痕愈合率明

作者:冯力元;吴佳捷

来源:中南大学学报(医学版) 2014 年 39卷 1期

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作者:
冯力元;吴佳捷
来源:
中南大学学报(医学版) 2014 年 39卷 1期
标签:
HMGB1 RNA干扰 子宫内膜癌细胞 侵袭 迁移 HMGB1 RNA interference endometrial carcinoma invasion migration
目的:探讨靶向HMGB1的shRNA对HMGB1表达改变的影响及其与子宫内膜癌细胞侵袭与迁移力改变的关系.方法:运用RNA干扰技术,构建HMGB1短发夹RNA(pshRNA-1 /HMGB1,pshRNA-2/HMGB1,pshRNA-3/HMGB1),同时设置转染非特异性质粒的阴性对照组(HMGB1/p-NC)和脂质体转染组(Lipo组),用脂质体法转染人子宫内膜癌细胞(HEC-1A),利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测转染后48 h各组细胞HMGB1在mRNA和蛋白水平的表达,Transwell小室法观察转染HMGB1 shRNA后HEC-1A细胞的侵袭情况,细胞划痕实验观察转染HMGB1 shRNA后HEC-1A细胞的迁移情况.结果:RT-PCR显示:3组重组质粒HMGB 1-pshRNAs转染后,HMGB1 mRNA相对表达水平分别是0.192±0.006,0.055±0.002和0.123±0.086,较Lipo组(0.268±0.008)和HMGB1/p-NC组(0.270±0.004)明显减少(P<0.05),最大抑制率分别达28.4%,79.5%和54.1%.Western印迹显示:HMGB1蛋白相对表达水平分别是0.259±0.129.0.032±0.002和0.104±0.007,较Lipo组(0.347±0.007)和HMGB1/p-NC组(0.349±0.007)明显减少(P<0.05),最大抑制率分别达25.4%,90.8%和70.0%.实验组在接种后48 h,穿过Transwell小室膜的细胞数显著少于HMGB1/p-NC组和Lipo组(P<0.05).划痕愈合实验亦显示实验组划痕愈合率明