目的：利用转录介导的扩增技术(transcription mediated amplification，TMA)扩增HCV RNA，并与实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)进行比较，探讨TMA系统的稳定性及其与RT-PCR的灵敏性差异和相关性，以及TMA临床应用的意义。方法：利用鼠白血病反转录酶(moloney murine leukemia virus，MMLV)、T7 RNA聚合酶及2条特异性引物等建立TMA扩增体系；通过HCV RNA的扩增曲线的相关性变化，评价不同储存温度对TMA扩增体系的稳定性和重复性的影响；通过扩增一组10倍梯度稀释的HCV RNA体外转录样本，评价TMA体系与RT-PCR的灵敏性差异。收集101份临床诊断为慢性丙型肝炎患者的血清，同时采用TMA试剂和RT-PCR试剂进行检测，比较两种方法的阳性检出率，并利用直线相关和回归探讨两种方法检测血清HCV RNA的相关性。结果：成功地建立了TMA扩增体系，该体系在室温下放置24 h，结果影响较大，但在4℃储存6 d，-20℃下储存6个月内扩增效果不受影响，稳定性良好。与湖南圣湘生物技术公司RT-PCR试剂检测结果的比较显示：31份血清标本TMA及RT-PCR均检测到阳性20例，阴性11例，检测一致率为100
作者：吴大先；刘菲；刘洪波；戴立忠；谭德明
来源：中南大学学报（医学版） 2014 年 7期
