目的:作为理想的种子细胞,成纤维细胞的高效获取及纯化尤为重要.本研究通过比较改良组织块培养法(improved tissue culture method,ITCM)及酶消化培养法(enzyme digestion method,EDM)分离培养人包皮成纤维细胞(human foreskin fibroblasts,HFF),以探讨两种方法的优缺点.方法:ITCM是将剪碎的皮肤组织置0.1％II型胶原酶中于4℃下消化过夜,分离表皮与真皮,对真皮组织采用0.25％胰酶于室温下再次消化15 min,待组织块贴壁于培养皿后进行培养.EDM是将剪碎的皮肤组织置0.25％胰酶中于4℃下消化过夜,分离表皮与真皮,将真皮组织再次于4℃下用0.1％II型胶原酶消化过夜,然后将组织块与酶的混合物一起过滤、挤压,用含有胎牛血清的培养基冲洗滤网,对得到的细胞悬液进行培养.ITCM与EDM均采用两种酶进行消化,但两种酶的使用顺序、消化时间及温度不同,最终接种于培养皿中进行后续培养的分别是组织块和细胞悬液.本研究利用ITCM和EDM分离、培养HFF,观察ITCM组和EDM组HFF的原代至第3代(Passage 0～Passage 3,P0～P3)的细胞形态;染色波形蛋白、CD68和角蛋白以鉴定细胞纯度;绘制P3生长曲线对比两组细胞的增殖能力.采取120 mJ/cm2的中波紫外线(medium-wave ultraviolet,UVB)照射P3 ITCM组和EDM组HFF,建立光损伤模型.根据有无照

作者：曹卉；王薇；肖敬川；黄邓高；高元慧；朱丹

来源：中南大学学报（医学版） 2021 年 46卷 8期