目的制备胃癌多药耐药相关性单克隆抗体(mAb),并以该抗体筛选肿瘤耐药细胞表位文库,以获得肿瘤耐药相关的新基因片段.方法采用杂交瘤技术,以胃癌耐药细胞株SGC7901/ VCR为免疫原制备胃癌多药耐药相关性,mAbMGr1,并以MGr1作为探针对肿瘤耐药细胞表位文库反复进行筛选;对稳定阳性重组子所携带的cDNA片段进行正反向测序,并将测序结果输入GeneBank进行同源性分析;原位杂交与Northern blot检测阳性克隆在不同组织细胞中的表达.结果经过21次融合获得了26株培养上清能与SGC7901/ VCR结合的杂交瘤克隆,经免疫组化和单克隆抗体逆转耐药实验发现其中一株mAb在SGC7901/ VCR膜表面及胞内的表达显著高于其相应的药物敏感细胞SGC7901,并能部分逆转SGC7901/ VCR对ADR和5-FU的耐药性. Western blot表明该mAb对应的抗原Mr 800 000～110 000,与Pgp和MRP不同,该株mAb被命名为MGr1. 以MGr1筛选文库,获得了5个能与MGr1抗体结合的携带阳性重组子的菌落,经反复筛选后,证实有一个稳定的阳性克隆;正反向测序结果表明该阳性cDNA片段长度为310 bp,GeneBank检索显示该片段无任何同源性;原位杂交表明该基因在肝、食管、胃、大肠的正常组织均未见表达,Northern blot证实该基因在胃癌细胞SGC7901,胃癌耐药细胞SGC7901/ VCR,食管癌细胞EC1

作者：时永全；肖冰；苗继延；李明峰；乔泰东；陈宝军；陈峥；韩军良；周绍娟；樊代明

来源：华人消化杂志 1998 年 8期