目的:建立耐VP16的胃癌耐药细胞株, 并初步探讨细胞发生VP16耐药的可能机制.方法:采用药物浓度梯度递增法诱导建立OCUM-2M/VP16耐药株. 细胞计数法绘制细胞生长曲线, 计算细胞倍增时间. MTT法检测细胞对6种化疗药物的IC50. 流式细胞仪分析细胞周期分布. 逆转录多聚酶链反应检测caspase-3, P53, DAPK-1, DAPK-2, DAPK-3,Bcl-2, ERCC-1, MDR-1及MRP基因mRNA的表达.结果:OCUM-2M/VP16成功实现了对VP16的耐药, 耐药指数为40.53; 其增殖速率及细胞倍增时间明显低于OCUM-2M(细胞倍增时间:22.96±0.96 h vs 30.29±2.55 h, P <0.01).OCUM-2M/VP16对Sn38、奥沙利铂及吉西他滨发生了交叉耐药, 但对5-FU及紫杉醇敏感性与亲代类似. OCUM-2M/VP16凋亡相关基因DAPK-2, DAPK-3和Bcl-2表达下调(OCUM-2M表达值为:0.61、0.79及0.81, OCUM-2M/VP16为, 0.24、0.45、0.44, P <0.01), 耐药相关基因 ERCC-1和MDR-1表达上调(OCUM-2M为0.53及0.20, OCUM-2M/VP16则为0.84及0.41, P <0.01). caspase-3, P53, DAPK-1及MRP表达无变化.结论:成功构建胃癌耐药细胞株OCUM-2M/VP16, 该细胞株具有交叉耐药特性, 耐药机制涉及凋亡、耐药等多个基因表达变化.

作者：邱红；丁方勇；熊慧华；张明生；李瑞超；陈元

来源：世界华人消化杂志 2009 年 17卷 18期