目的:构建并表达靶向IgA肾病分泌糖基化缺陷IgA1分子B细胞(Gd-B)的人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1重组蛋白病毒样颗粒(VLPs)基因载体.方法:PCR定点突变技术构建HPV16 L1-PH嵌合基因片段并与pPIC9K载体连接获得重组表达质粒;将上述质粒通过电转化形式转入毕赤酵母GS115,并在甲醇诱导下表达HPV16 L1-PH嵌合蛋白;对Ni柱纯化后获得的目的蛋白分别进行SDS-PAGE和LC-MS/MS鉴定;加入解组装及组装缓冲液对目的蛋白进行包装,透射电镜观察病毒样颗粒的结构及形态.结果:纯化后的重组蛋白经SDS-PAGE和LC-MS/MS鉴定确定所检测胶点中的蛋白质为与目的蛋白预测值相同.透射电镜分析粒径分布和结构与预测值相同.病毒样颗粒在组装及解组装缓冲液作用下通过电镜可观察到发生组装及解组装.结论:本研究成功获得了靶向IgA肾病患者异常Gd-B细胞的嵌合HPV16 L1-PH嵌合蛋白,为IgA肾病下一步实验研究与靶向性治疗奠定了基础.
作者：陈朝威；颜奇；张勤；付强；王惠明；丁国华
来源：武汉大学学报（医学版） 2017 年 38卷 2期
