目的：建立人乳头瘤病毒6型（HPV6）全基因体外组织工程皮片培养模型，为进一步研究 HPV病毒周期奠定基础。方法用电转的方法，将 HPV6全长线性基因和质粒 pEGFP-▲EGFP 共转染 hTERT 细胞，G418抗性筛选，Southern 印迹法检测细胞内 HPV 病毒含量；3T3 J2滋养层细胞、I 型鼠尾胶原与含 HPV6基因的 hTERT 细胞（HPV6.hTERT 细胞）混合后，在金属网格上共同培养，逐渐形成皮片样结构。 HE 染色和免疫组化检测皮片的组织结构和 HPV6 L1蛋白表达，电镜检查皮片病毒颗粒。结果 HPV6全长线性基因成功转入 hTERT 细胞，Southern 印迹法检测细胞内含 HPV6 DNA；与3T3 J2细胞、I 型鼠尾胶原共同培养的 HPV6. hTERT 细胞随时间而增殖分化，逐渐形成具有疣状增生外观的皮片。皮片 HE 染色显示，培养7 d 即出现典型的皮肤分层结构；培养21 d 皮片可见明显乳头瘤样增生、空泡细胞、角化过度、角化不全等 HPV 感染组织病理表现。免疫组化显示皮片上部有 HPV6 L1蛋白表达。电镜检测发现皮片中存在 HPV6病毒颗粒。结论 HPV6全基因组织工程皮片培养模型为 HPV 的生物学研究提供了一个平台，但在应用上有一定的局限性。
作者：王飞；郭宗科；张红叶；潘永正；董正邦；陈梅；单莹；严翘；余卫平
来源：中华皮肤科杂志 2015 年 5期
