目的 建立人釉原蛋白(AMG)成熟肽基因在大肠杆菌中融合表达和纯化的技术路线.方法 利用已构建并经鉴定的重组质粒pGEX-4T-1/AMG转化大肠杆菌BL21,分别对诱导时间、异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)浓度和诱导温度进行优化,在最佳诱导表达条件下,分别对菌液上清、周质、胞质和包涵体中的目的 蛋白表达进行分析,在可溶性蛋白中发现大量目的 蛋白,随后利用GSTrapFF亲和层析柱进行人AMG融合蛋白的过柱纯化.结果 pGEX-4T-1/AMG重组质粒的双酶切凝胶电泳鉴定结果和测序鉴定结果和预期一致.最佳诱导时间为14.5 h、最佳诱导剂浓度为1.0mmol/L、最佳诱导温度为20℃,在此条件下目的 蛋白的表达量达到峰值.在最佳诱导条件下,胞质蛋白和包涵体中都有大量的目的 蛋白.提取大量胞质蛋白,经GSTrapFF亲和层析柱纯化,收集纯化液,进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,显示成功纯化TAMG融合蛋白,在提取液洗涤2次后,可获得高纯度的融合蛋白.结论 利用pGEX-4T-1/AMG原核表达体系成功获得纯化的人AMG融合蛋白.
作者：张雪洋；赵华；赵红宇；王春先；章锦才
来源：华西口腔医学杂志 2008 年 26卷 1期
