目的 对比研究三种乳鼠原代心肌细胞消化分离方法,比较不同方法分离获取的心肌细胞在数量、纯度、活力上的差异,为相关实验研究提供选择.方法 按照不同的消化方法进行分组,A组为0.08％胰蛋白酶单纯消化组;B组为0.08％胰蛋白酶+0.08％Ⅱ型胶原酶混合消化组;C组为0.08％胰蛋白酶和0.08％Ⅱ型胶原酶分离消化组.记录差速贴壁后的细胞数和活细胞率,对贴壁24 h后的心肌细胞进行免疫荧光染色,计算心肌细胞纯度,通过激光共聚焦显微镜对JC-1染色的心肌细胞进行线粒体膜电位检测,比较红绿荧光密度的差异,通过能量代谢间接反映细胞活力.结果 三种方法分离获得的心肌细胞数差异无统计学意义(P＞0.05),而活细胞率C组高于A组(P＜0.01);三组分离获得的心肌细胞纯度差异无统计学意义(P＞0.05);线粒体膜电位,A组荧光比值为0.928±0.078,B组荧光比值为0.943±0.099,C组荧光比值为1.160±0.089,三组之间差异有统计学意义(P＜0.01),C组线粒体膜电位高于A组和B组(P＜0.01).结论 三种消化方法在细胞数和细胞纯度上无明显差异,0.08％胰蛋白酶和0.08％Ⅱ型胶原酶分离消化的心肌细胞在活细胞率和细胞活力方面更优,可以作为常规的乳鼠心肌细胞分离方法的选择.
作者：段鹏；王金鑫；刘晓静；卫世强；段玉慧；朱庆磊
来源：四川大学学报（医学版） 2017 年 48卷 2期
