目的 构建人HIF-1α基因RNAi重组腺病毒Ad.HIF-1α,并观察其对人肺腺癌细胞SPCA-1的影响.方法 采用酶切、连接、转化等方法,利用AdEasy系统构建插入HIF-1α RNAi片段的重组腺病毒Ad.HIF-1α.氯化铯梯度离心法纯化病毒.病毒功能滴度采用传导293细胞的方法,以2 MOI Ad.HIF1α传导SPCA-1细胞,48 h后应用流式细胞术检测绿色荧光蛋白(GFP)表达和HIF-1α蛋白表达.HIF-1α mRNA表达用荧光定量PCR检测.结果 酶切和卡那霉素抗性筛选证实,重组穿梭载体pAdTrack.HIF-1α和腺病毒质粒pAd.HIF-1α均构建正确.pAd.HIF-1α导入293细胞3 d,约15
作者：宋现让；魏玲；王兴武；宋宝；郑燕
来源：基础医学与临床 2007 年 27卷 11期
