目的：构建靶向CIP2A的shRNA真核表达质粒并探讨其对胃癌细胞增殖的调节作用。方法根据siRNA原理设计4对靶向CIP2A的siRNA序列，克隆到真核表达载体pGPU6／GFP／Neo中（shRNA-1、2、3和4）。脂质体转染人胃癌细胞系BGC-823，real-time PCR和Western blot法检测并筛选最佳抑制效率的shRNA表达质粒，CCK-8法检测对胃癌细胞增殖的影响。结果4个靶向CIP2A的shRNA真核表达质粒经限制性酶切和测序证实基因已正确插入，转染效率可达到70％以上。转染后24、48和72 h，4个质粒均明显降低BGC-823细胞内CIP2A mRNA 和蛋白的表达。相较于其他3个重组质粒，shRNA-1的抑制作用更为显著，且对胃癌细胞增殖有明显的抑制作用（ P＜0.05）。结论成功构建的靶向CIP2A的shRNA真核表达质粒，可有效抑制胃癌细胞CIP2A的mRNA和蛋白表达，并抑制胃癌细胞的增殖，为今后研究CIP2 A在胃癌中的作用机制奠定了基础。
作者：师海蓉
来源：基础医学与临床 2015 年 2期
