目的 探讨大肠癌耐药LoVo/Adr细胞自噬状态对多药耐药(MDR)的影响.方法 体外培养LoVo/Adr细胞,应用透射电镜观察细胞自噬体形成情况,采用MDC荧光染色及流式细胞术定量分析自噬率,MTT法测定细胞对阿霉素(ADR)的半数抑制浓度(IC50),RT-PCR检测MDR1基因的mRNA水平,Western blotting检测P糖蛋白(P-gp)表达水平.结果 LoVo/Adr细胞中可见散在自噬体或点状绿色荧光分布,自噬率为3.1％±0.5％;ADR和雷帕霉素(RApA)单独作用时,自噬体明显增多,自噬率分别为33.6％±5.1％和45.2％±6.1％(P＜0.05),ADR和RAPA联合作用时可见大量自噬体形成,自噬率为76.2％±7.4％,显著高于二者单独作用时(P＜0.05); LoVo/Adr细胞对ADR的IC50为3.05±0.52mg/L,RAPA作用后IC50降至1.12±0.21mg/L(P＜0.01),RAPA具有逆转耐药的作用,逆转倍率为2.26倍;LoVo/Adr细胞MDR1 mRNA和P-gp蛋白呈高表达,在RAPA作用下,MDR1 mRNA表达量由1.42±0.31降至0.54±0.20(P＜0.05),P-gp蛋白表达量由0.67±0.14降至0.15±0.08(P＜0.01),RAPA显著下调了MDR1 mRNA及蛋白的表达.结论 多药耐药的LoVo/Adr细胞呈低自噬状态,RAPA可通过提高细胞的自噬活性而逆转MDR,逆转途径可能与促进细胞自噬性死亡和下调MDR1基因的表达有关.

作者：马强；常宗宏；王彪猛；王维；邓尚新

来源：解放军医学杂志 2013 年 38卷 11期