目的 观察慢病毒载体介导的增强型绿色荧光蛋白(LV-EGFP)经不同浓度和途径转染大鼠角膜的转染效率及毒性,探讨慢病毒转染角膜的最佳途径.方法 25只SD大鼠,随机分为5组.A组为感染复数(MOI) =5点眼组,B组为MOI=5结膜下注射组,C组为MOI=10点眼组,D组为MOI=10结膜下注射组,E组为MOI=10离体转染组,各组予以相应浓度LV-EGFP.7d后取转染后角膜于荧光显微镜下观察荧光分布,并分析荧光强度;HE染色观察转染后角膜细胞病理改变.结果 荧光显微镜观察显示,相同MOI组之间比较,点眼方式的角膜荧光分布较结膜下注射方式均匀.各组相对荧光强度值分别为:A组0.1803±0.0440,B组0.1061±0.0434,C组0.2369±0.0157,D组0.2002±0.0307,E组0.2434±0.0173,点眼方式的角膜荧光强度高于结膜下注射方式(P＜0.05),且MOI增加时EGFP表达增强(P＜0.05).E组荧光强度明显高于A、B、D组(P＜0.05),但与C组比较差异无统计学意义(P＞0.05).HE染色显示各组角膜细胞形态正常,未见明显凋亡细胞.离体转染角膜经过7d培养液转染后,角膜内皮细胞生长良好,未出现皱缩、变形及缺失等病理改变.结论 LV-EGFP可在较低MOI下有效转染大鼠角膜,且持续转染的安全性良好;点眼方式的转染效率高于比结膜下注射,提高MOI能提高角膜转染的效率.
作者：刘立；赵敏
来源：解放军医学杂志 2014 年 39卷 4期
