目的 探究肌微管素相关蛋白7(Mtmr7)在小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移中的作用及其机制.方法 培养小鼠主动脉平滑肌细胞系(MOVAS),用30 ng/ml血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)诱导小鼠VSMCs体外增殖和迁移,采用qRT-PCR和Western blotting分别检测PDGF-BB干预后Mtmr7 mRNA和蛋白表达水平的变化.为探究Mtmr7对小鼠VSMCs增殖和迁移的作用,用Mtmr7基因过表达腺病毒(Ad-Mtmr7)感染VSMCs促使Mtmr7过表达,将MOVAS分为对照组、Ad-Mtmr7组、PDGF-BB组、Ad-Mtmr7+PDGF-BB组4组,采用Ki-67细胞免疫荧光染色、CCK-8法检测VSMCs增殖能力,划痕实验检测VSMCs迁移能力,Western blotting检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)下游靶标蛋白水平.用5 mg/L胰岛素(insulin)恢复mTORC1活性,将MOVAS分为PDGF-BB组、Ad-Mtmr7+PDGF-BB组、Ad-Mtmr7+PDGF-BB+insulin组3组,再次检测上述指标,观察Mtmr7对小鼠VSMCs增殖和迁移的影响.构建小鼠颈动脉内皮损伤模型,造模28 d后,Western blotting检测Mtmr7蛋白表达水平变化.随机将小鼠分为4组(n=10):假手术组、假手术+Ad-Mtmr7组、颈动脉内皮损伤组、颈动脉内皮损伤+Ad-Mtmr7组.在小鼠手术后立即用Ad-Mtmr7(5×1010 pfu/ml)行颈动脉局部孵育30 min,在造模第7、14、21天行尾静脉注射
作者:赵维维;杨大春;孙雄山
来源:解放军医学杂志 2022 年 47卷 6期